中文简体
Nagpatakbo ka lang ng gradient method na gumana nang perpekto noong nakaraang linggo. Ang mga pamantayan sa pagkakalibrate ay mukhang malinis, ngunit ang sample na chromatogram ay nagpapakita ng dagdag na peak sa 23.8 minuto. Papalitan mo ang column, maghanda ng sariwang buffer, at suriin ang detector. Nandoon pa rin ang rurok. Pagkatapos ay palitan mo ang tubig na papasok sa mobile phase, at mawawala ang artifact. Iyan ang realidad ng high performance na liquid chromatography: ang kadalisayan ng tubig ay nasa ilalim ng bawat paghihiwalay, at kapag nagbago ito, nagbabago ang paraan kasama nito.
Ang water purity ay nakakaapekto sa kalidad ng data ng HPLC sa apat na praktikal na paraan: baseline stability, peak shape, retention reproducibility, at instrument lifetime. Ang mga kontaminant na kasangkot ay maaaring mga organikong molekula, dissolved ions, particle, o microbes. Kahit na ang isang maliit na halaga ng isang uri ng karumihan ay maaaring magdulot ng mga kahihinatnan na hindi katumbas ng konsentrasyon nito.
Ang Mga Pangunahing Epekto ng Kadalisayan ng Tubig sa HPLC
Sa isang sistema ng HPLC, ang tubig ay isang reagent, hindi isang pasibo na background. Dinadala nito ang buffer, dissolves ang sample, at nag-aambag sa background ng detector. Ang mga dumi sa tubig samakatuwid ay direktang lumipat sa analytical signal. Ang talahanayan sa ibaba ay nagbubuod sa mga pinakakaraniwang contaminant at ang mga epekto nito.
| Contaminant | Mga Halimbawa o Pinagmulan | Epekto sa HPLC |
|---|---|---|
| Mga natunaw na organiko | Humic substance, plasticizer, mga residu sa paglilinis, solvent vapors | UV-absorbing ghost peak, baseline drift, mga pagbabago sa pagpapanatili |
| Mga inorganic na ion | Sodium, chloride, silicate, trace metal | Mga pagbabago sa conductivity, interference sa ion chromatography at LC-MS, metal-related peak broadening |
| Mga partikulo | Mga multa ng resin, alikabok, namuo | Naka-block na frits, tumataas na backpressure, pump seal wear, maingay na baseline |
| Mga natunaw na gas | Oxygen, carbon dioxide, nitrogen | Mga bula sa detector, baseline spike, pH drift |
| Mga mikroorganismo | Mga bakterya at biofilm sa mga lalagyan ng imbakan | Fouling ng column, barado na frits, huwad na mga taluktok, kawalan ng katatagan ng pamamaraan |
Ang mga epektong ito ay hindi lamang teoretikal. Ang isang microbial biofilm sa isang water reservoir ay maaaring maglabas ng UV-absorbing metabolites, at sa sandaling mabuo ang film na iyon, ang pagpapalit lang ng tubig ay maaaring hindi malutas ang problema hanggang ang reservoir ay nalinis at na-sanitize.
Ano ba talaga ang ibig sabihin ng "HPLC-Grade" at Type 1 Water
Karamihan sa mga analytical na pamamaraan ay tumatawag para sa tubig na nakakatugon sa Type 1 na mga pagtutukoy. Sa praktikal na mga termino, ibig sabihin, ang resistivity sa 25 degrees Celsius ay humigit-kumulang 18.2 megohm-centimeters, ang conductivity ay malapit sa 0.055 microsiemens per centimeter, at ang kabuuang organic carbon ay sapat na mababa na ang tubig ay hindi lumikha ng nakikitang UV o MS na background. Ang resistivity lamang ay hindi sapat. Kailangan mo ring malaman ang antas ng TOC, bilang ng particle, at, sa ilang mga aplikasyon, mga halaga ng silicate o sodium.
Ang pH ng purified water ay hindi isang kapaki-pakinabang na detalye. Ang ultrapure na tubig ay halos walang buffering capacity, at mabilis itong sumisipsip ng carbon dioxide mula sa hangin, kaya ang sinusukat na pH sa paligid ng 5.6 ay sumasalamin lamang sa natunaw na CO2. Ang pH na mahalaga ay ang pH ng buffered mobile phase na inihahanda mo.
Ang mga kinakailangan sa kalidad ng tubig ay nakasalalay din sa detektor. Ang pagtuklas ng UV sa 210 nm ay partikular na sensitibo sa organic na kontaminasyon dahil maraming carbon-oxygen at carbon-nitrogen bond ang sumisipsip doon. Ang LC-MS ay nangangailangan ng tubig na may napakababang nonvolatile impurities upang maiwasan ang pagsugpo ng ion at pagbuo ng adduct. Ang mga evaporative detector ay parehong apektado ng nonvolatile contamination dahil pinapataas nito ang background signal. Ang Type 1 na tubig ay samakatuwid ay isang tunog na panimulang punto para sa halos bawat aplikasyon ng HPLC.
Maaaring gumana ang de-boteng tubig na may grade HPLC, ngunit kailangan itong itago at hawakan nang tama. Suriin ang sertipiko ng pagsusuri, itala ang numero ng lot, at huwag ipagpalagay na ang isang lumang lalagyan ay walang biological growth.
Ginagawang Nakikita ng Gradient Elution ang Mga Dumi ng Tubig
Ang mga dumi ng tubig ay pinaka nakikita sa mga pamamaraan ng gradient. Sa isang isocratic run, ang isang UV-absorbing contaminant ay maaaring itaas lamang ng kaunti ang baseline. Sa isang gradient, ang water fraction ay nagsisimula nang mataas at ang organic solvent fraction ay tumataas sa paglipas ng panahon. Maaaring mapanatili ang mga kontaminant sa ulo ng column at pagkatapos ay maalis habang tumataas ang organikong nilalaman. Gumagawa ito ng mga ghost peak at isang drifting baseline na maaaring makagambala sa integration at quantitation.
Iyon ang dahilan kung bakit ang isang blangkong gradient ay isa sa mga pinakasimpleng pagsusuri para sa kalidad ng tubig. Patakbuhin ang iyong eksaktong gradient nang hindi nag-inject ng sample. Kung lalabas ang mga taluktok sa blangko, pinaghihinalaan ang mobile phase.
Mga Pang-araw-araw na Gawi na Pinoprotektahan ang Kadalisayan ng Tubig
Ang dalisay na tubig ay hindi nananatiling dalisay nang hindi sinasadya. Pinipigilan ng mga sumusunod na gawi ang mga pinakakaraniwang problema sa pagsasanay sa HPLC.
- Gumamit ng tubig mula sa isang purification system na may mga sariwang cartridge, isang gumaganang UV lamp, at regular na sanitization.
- Mag-ipon ng tubig sa isang malinis at nakatakip na lalagyan. Huwag hayaang bukas ang lalagyan habang tumatakbo ang system.
- Huwag mag-imbak ng tubig sa loob ng ilang araw. Ihanda ang mobile phase na may sariwang tubig sa parehong araw hangga't maaari.
- Iwasang magdagdag ng sariwang tubig sa isang bahagyang punong imbakan ng tubig. Palitan ang mga nilalaman ng reservoir sa halip na itaas ang mga ito.
- Magpatakbo ng blangko na gradient sa wavelength na ginamit para sa pagsusuri at itala ang resulta.
- Idokumento ang resistivity, TOC, at ang petsa ng pagkolekta ng tubig sa iyong mga analytical record.
Para sa mga lab na gumagamit ng de-boteng tubig, ang parehong mga patakaran ay nalalapat. Suriin ang petsa ng pag-expire, isara kaagad ang lalagyan pagkatapos gamitin, at huwag ibalik ang hindi nagamit na tubig mula sa isang beaker sa bote.
Ginagawang Problema ng Pamamaraan ng Mga Additives ang Problema sa Tubig
Ang mga mobile phase ay bihirang naglalaman ng tubig lamang. Ang mga buffer salt, acid, ion-pair reagents, at ilang espesyal na modifier ay idinaragdag sa medyo mababang konsentrasyon. Kung ang tubig ay naglalaman ng mga bakas na sumisipsip ng UV na mga dumi, ang mga dumi na iyon ay maaaring hindi magbago sa kapasidad ng buffer, ngunit maaari pa rin silang lumabas sa signal ng detector.
Minsan ginagamit ang mga ionic na likido bilang mga modifier ng mobile phase upang mapabuti ang peak shape o selectivity. Kapag pumili ka ng isa, dapat na ilapat ang parehong pamantayan ng kadalisayan. Halimbawa, 1-ethyl-3-methylimidazolium tetrafluoroborate ay isang karaniwang ionic na likido para sa chromatographic na pag-aaral. Dapat itong matunaw sa tubig na nakakatugon na sa mga pagtutukoy ng Type 1; kung hindi, ang additive ay nagiging isa pang pinagmumulan ng kontaminasyon. Kung gusto mong maunawaan ang mga katangiang nauugnay sa paghihiwalay ng mga compound na ito, ang aming pangkalahatang ideya kung paano gumaganap ang mga ionic na likido sa mga proseso ng paghihiwalay sumasaklaw sa mga praktikal na variable.
CAS:143314-16-3 -1 -Ethyl-3-methylimidazolium Tetrafluoroborate Liquids Supplier Ang Ldet Technology ay custom na CAS ng China:143314-16-3 -1 -Ethyl-3-methylimidazolium Tetrafluoroborate Liquids na mga supplier at 1 -Ethyl-3-methylim... Tingnan ang Produkto → Ang Kadalisayan ay Nagsisimula sa Supplier
Sa Zhejiang Ldet, gumagawa kami ng mga ionic na likido at mga espesyal na kemikal. Alam namin mula sa produksyon na ang isang bakas na karumihan sa isang panimulang materyal ay maaaring magbago sa downstream na pagganap. Iyon ang dahilan kung bakit sinusuri namin ang nilalaman ng tubig, mga natitirang halide, at pag-uugali ng UV bago ilabas. Ang parehong disiplina ay nabibilang sa isang HPLC lab: pumili ng mga materyales na kasama ng mga dokumentadong detalye. Halimbawa, 1-butyl-3-methylimidazolium tetrafluoroborate ay available sa purity data na nagbibigay-daan sa iyong masuri kung ito ay tugma sa iyong paraan ng pag-detect.
CAS: 174501-65-6-1-Butyl-3-methylimidazolium tetrafluoroborate Mga Supplier ng Liquid Ang Ldet Technology ay China custom CAS: 174501-65-6-1-Butyl-3-methylimidazolium tetrafluoroborate Liquids na mga supplier at 1-Butyl-3-methylimid... Tingnan ang Produkto → Ano ang Titingnan sa isang Sertipiko ng Pagsusuri
- Ang natitirang nilalaman ng halide, dahil ang mga halide ay maaaring makaapekto sa mga paghihiwalay at kaagnasan ng palitan ng ion.
- Ang nilalaman ng tubig, dahil binabago ng tubig ang epektibong konsentrasyon ng additive.
- Isang UV spectrum o UV cutoff, para mahulaan mo ang pagsipsip ng background.
- Lot-to-lot consistency, dahil hindi dapat tahimik na baguhin ng bagong lot ang iyong pamamaraan.
Kung kailangan mo ng tulong sa pagtutugma ng materyal sa isang pamamaraan, magagawa mo talakayin ang data ng kadalisayan at mga custom na kinakailangan sa aming technical team .
Tratuhin ang Tubig bilang Bahagi ng Paraan
Ang kadalisayan ng tubig sa HPLC ay hindi isang beses na pag-setup. Ito ay isang pang-araw-araw na variable na maaaring magbago sa panahon, bote ng imbakan, at kondisyon ng sistema ng paglilinis. Gumamit ng Type 1 na tubig, kumpirmahin ang TOC at resistivity, hawakan ito ng maayos, at pumili ng mga additives na may kakayahang masubaybayan. Sa isang paraan na binuo sa nanograms ng analyte, ang tubig ay hindi kailanman "tubig lamang."
